提供必要成分,能与靶 DNA 或者随试剂盒提供的对照 DNA 一起形成未加修饰的重组人类核小体。操作步骤包括在高盐条件下,将 DNA 与已经形成并且纯化的重组人类组蛋白 H2A/H2B 二聚体及组蛋白 H3.1/H4 四聚体混合,然后通过透析降低盐浓度进而形成核小体。一个四聚体结合两个二聚体在 DNA 上形成八聚体,这就组成了核小体。我们提供检测核小体形成的方法是观察凝胶电泳迁移率的改变。某些酶不能单独作用于 DNA 或者核心组蛋白中的某成分,那么这些核小体就可以作为这类酶的更佳底物。每次反应可以加入约 50 pmol 208 bp 的 DNA 生成核小体,根据实验需要可以适当缩放体系。
重组人类组蛋白 H2A/H2B 二聚体是将变性、纯化的亚单位 H2A 和 H2B 复性后,再经凝胶过滤得到的。重组人类组蛋白 H3.1/H4 四聚体是将变性、纯化的亚单位 H3.1 和 H4 复性后,再经凝胶过滤得到的。二聚体和四聚体都经过高度纯化,可单独购买用于组蛋白修饰研究。
核小体对照 DNA 是来源于 Lytechinus variegates 5Sr-DNA 的 208 bp 片段,能用于核小体单体的形成。
used to make unmodified recombinant human nucleosomes with user-supplied DNA or the provided control DNA. Purified recombinant human Histone H2A/H2B Dimer and Histone H3.1/H4 Tetramer are mixed with DNA at 2 M NaCl. To generate nucleosomes, the salt concentration is lowered by dilution or dialysis allowing each histone tetramer to associate with two histone dimers and form the histone octamer on the DNA (1,2). A method for assaying nucleosome formation by gel shift assay is included. These nucleosomes may serve as better substrates for enzymes that are inactive on the DNA or one of the core histones alone (3,4). Each reaction creates nucleosomes from ~1 µg of 208 bp DNA and may be scaled depending on the experiment.